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本试剂盒适用于从细胞和动物组织制备胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒（HR0165）。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（HR0389）。

• 使用方便，从细胞/组织提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 如果试剂不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 细胞蛋白提取
  
  • 提取液制备：
    每500μL冷的胞浆蛋白提取液A加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂，充分混匀。
    注：
    ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制剂可以一次加入。
    ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
    
  • 取5～10×10⁶个细胞，在4℃，500×g力条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
    
  • 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
    
  • 每20μL细胞压积（细胞沉淀体积，约20mg，2×10⁶个细胞）中加入200μL冷的提取液A，高速涡旋振荡混匀或吹打混匀，置2～8℃条件振荡20～30分钟。
    注：
    ● 提取液A处理后细胞体积应减少，否则延长提取液A振荡处理时间。
    ● 根据预实验结果，可稍微减少试剂A的用量，以提高获得的胞浆蛋白样品的浓度。
    ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
    ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
    
  • 然后在4℃，16000×g条件下离心10分钟。
    
  • 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
    
  • 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
    注：
    ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
    ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
• 组织蛋白提取
  
  • 提取液制备：
    每500μL冷的胞浆蛋白提取液A加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂，充分混匀。
    注：
    ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制剂可以一次加入。
    ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
    
  • 取适量组织样本用剪刀剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
    
  • 匀浆液在4℃，500×g力条件下离心5分钟，弃上清。
    
  • 每20μL细胞压积（沉淀体积，约20mg）中加入200μL冷的提取液A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2～8℃条件振荡20～30分钟。
    注：
    ● 提取液A处理后细胞体积应减少，否则延长提取液A振荡处理时间。
    ● 根据预实验结果，可稍微减少试剂A的用量，以提高获得的胞浆蛋白样品的浓度。
    ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
    ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
    
  • 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000×g力条件下离心10分钟。
    
  • 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
    
  • 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
    注：
    ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
    ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。